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水中粪大肠菌群的测定方法——酶底物法检测

  一、基本原理
 
  粪大肠菌群是总大肠菌群中的一部分,主要来自粪便。在44.5℃温度下能生长并发酵乳糖产酸产气的大肠菌群称粪大肠杆菌。
 
  用提高培养温度的方法,造成不利于来自自然环境的大肠菌群生长的条件,使培养出来的菌主要为来自粪便中的大肠菌群,从而更准确地反映出水质粪便污染的情况。粪大肠菌群 的测定可以用酶底物法。
 
  二、方法优势
 
  1.无需在无菌室内操作。
 
  2.手工操作时间小于1分钟。
 
  3.无需培养基制备和大量玻璃器皿灭菌。
 
  4.24小时即可完成定性定量分析,无需验证试验。
 
  三、配件以及技术方案:
 
  针对酶底物法检测的原理采购相应的设备。用途如下:
 
  程控定量封口机:用于定量检测盘的封口。
 
  酶底物检测试剂:用于选择性检测水中的目标细菌。
 
  51或97定量检测盘:用于判断目标微生物数量。
 
  100毫升定量瓶/取样瓶:专业的为水样与试剂提供溶解环境。
 
  紫外手持式紫外分析仪带暗室:测定大肠埃希氏菌时用于在暗室中观察荧光。
 
  四、操作方法:
 
  第一步:将水样加入100ml取样瓶中,加入酶底物法检测试剂,拧紧盖子摇匀至完全溶解。
 
  第二步:将样品加到定量检测盘中。
 
  第三步:使用程控定量封口机对定量检测盘进行样品分配及封口。
 
  第四步:粪大肠菌群的测定则将培养箱设定为44.5℃,培养24h。
 
  第五步:对照比色盘数阳性(显黄色,或荧光)格子数,按照使用的检测盘类型,分别查51孔或者97孔MPN表得出100毫升中大肠菌群的菌群数。对照MPN表出数据。
 
  第六步:根据稀释倍数最终结果按公式计算结果。
 
  大肠菌群(个/L)=MPN值×稀释倍数×1000mL/100mL。